إرشادات EMA للببتيدات المُخلَّقة: عتبات الشوائب والتوصيف والتحليل المتعامد

1 معلومات أساسية

2 الشوائب: الأنواع والعتبات

• العتبات: يُبلَّغ عن الشوائب المرتبطة بالببتيد فوق 0.1%، ويُتعرَّف عليها فوق 0.5%، وتُؤهَّل فوق 1.0%، استنادًا إلى Ph. Eur. 2034؛ ولا تنطبق ICH Q3A/B.
• القمم المتزامنة الشطف وغير المنفصلة: إذا شكّلت عدة شوائب قمة واحدة، تُطبَّق العتبات على القمة المجمّعة ما لم يُبرَّر خلاف ذلك.
• أنواع الشوائب المذكورة: المتماكبات الفراغية (التحوّل الفوقي)، وتسلسلات الحذف، والتسلسلات المقطوعة (المؤستلة)، وتسلسلات الإدخال؛ ونواتج التحلل كالأكسدة والتحلل المائي والتماكب ونزع الأميد والأسبارتيميد وثنائي الكيتوبيبرازين وحمض البيروغلوتاميك؛ والشوائب عالية الوزن الجزيئي كالتكتلات والثنائيات والقليلات.
• الشوائب غير الببتيدية: كواشف العملية، والمذيبات المتبقية، والشوائب العنصرية، والشوائب المطفّرة، والنيتروزامينات.

3 المواصفات والتوصيف

• الشوائب عالية الوزن الجزيئي: تُحدَّد حسب النوع (مثل الثنائيات والتكتلات)؛ ولا يُقبَل بند واحد بعنوان «شوائب عالية الوزن الجزيئي». والطريقة المذكورة هنا هي SEC.
• التعرّف: يوصى بطريقتين متعامدتين على الأقل؛ ويجب دراسة قدرة طرق الشوائب على الدلالة على الثباتية وتوازن الكتلة، وأن تبلغ عتبة الإبلاغ 0.1%.
• التوصيف: البنية الأولية بـ MS وLC-MS/MS وتحليل الأحماض الأمينية وNMR وتفكك إدمان؛ والبنية الثانوية بـ CD في الأشعة البعيدة وFTIR وNMR؛ والثالثية بـ CD في الأشعة القريبة وNMR؛ والتكتل باختبار صبغة ThT والفلورة الذاتية للتربتوفان.
• أخرى: يحتاج محتوى الأيون المعاكس إلى حد أعلى مبرَّر؛ ويُعبَّر عن المحتوى عادةً على أساس خالٍ من الأيون المعاكس والماء؛ ولا تُطلب الاختبارات البيولوجية عمومًا للإطلاق والثباتية.

4 الببتيدات المُخلَّقة ذات المرجع البيولوجي (القسم 6)

هذا القسم الأكثر تأثيرًا في الببتيدات الجنيسة. لا يمكن للببتيد المُخلَّق كيميائيًا سلوك مسار البدائل الحيوية، بل يُقارَن بمنتج مرجعي يُشترى من سوق الاتحاد الأوروبي:

1. البنية: مجموعة تحليلية كاملة للبنية الأولية والعليا؛ وتشمل طرق البنية العليا CD وFTIR وNMR ثنائي الأبعاد والفلورة وDSC.
2. النقاوة: طرق متعامدة حسب الحجم والشحنة والكراهية للماء؛ واختبار ThT عند الحاجة.
3. الشوائب: تُقارَن كل شائبة مرتبطة بالببتيد بين 0.1 و0.5% بالمرجع؛ ويجب ألا تثير الشوائب الغائبة عن المرجع مخاوف مناعية، وتُؤهَّل فوق 1.0%.
4. المناعية: قد يفيد التنبؤ الحاسوبي بالارتباط بمستقبل الخلايا التائية أو اختبارات تنشيط الخلايا التائية في المختبر.
5. التحلل القسري: دراسات مقارنة تشمل الإجهاد القصّي/الميكانيكي.
6. الوظيفة: ينبغي استخدام الاختبارات الخلوية.
7. الثباتية: لا يمكن استنتاج مدة الصلاحية من المنتج المرجعي.

5 المستحضرات قيد البحث (القسم 7)

• مراقبة الشوائب المفردة في وحدات بناء الأحماض الأمينية منذ مراحل التطوير المبكرة؛ ويُتوقَّع وضع حدود حسب الأهمية في المرحلتين الثانية والثالثة.
• في المرحلة الأولى يمكن الاعتماد على تقييم مخاطر مبني على المعرفة السابقة للشوائب عالية الوزن الجزيئي؛ أما في المرحلتين الثانية والثالثة فتلزم بيانات تجريبية.
• التعرّف على الشوائب المرتبطة بالببتيد فوق 1.0% وتأهيلها في دراسات غير سريرية؛ واستخدام الطرق المتعامدة والدالة على الثباتية مبكرًا.

6 ماذا يعني ذلك للعمل التحليلي

1. ضبط الشوائب عالية الوزن الجزيئي حسب النوع

   القسم 4.4

   حزمة البيانات المقترحة

   نوع التكتلات ومستواها

   الطرق

   قياس كمي بـ SEC مع طريقة لا تعتمد على عمود لتأكيد نوع التكتل (لا تذكر الإرشادات AUC؛ وهذا فحص متعامد نوصي به)

   ما تقدمه Quickgene

   تحليل التكتل والارتباط الذاتي بطريقة SV-AUC

2. مقارنة البنية العليا

   القسم 4.3, 6

   حزمة البيانات المقترحة

   تشابه كمي للبنية الثانوية والثالثية (معامل الارتباط، RMSD)

   الطرق

   CD في الأشعة فوق البنفسجية البعيدة والقريبة

   ما تقدمه Quickgene

   ثنائية اللون الدائرية (CD)

3. نقاوة متعامدة قائمة على الشحنة

   القسم 6

   حزمة البيانات المقترحة

   توزيع متغيرات الشحنة ومقارنة نقطة التعادل الظاهرية

   الطرق

   icIEF

   ما تقدمه Quickgene

   نقطة التعادل وعدم تجانس الشحنة بطريقة icIEF

4. الاختبارات الوظيفية الخلوية

   القسم 6

   حزمة البيانات المقترحة

   منحنى الجرعة–الاستجابة لتنشيط المستقبل والفعالية النسبية

   الطرق

   اختبارات خلوية بجين مخبر

   ما تقدمه Quickgene

   اختبارات الفعالية الخلوية; خط الخلايا المخبري CHO-GLP-1

5. مقارنة كل شائبة بين 0.1 و0.5%

   القسم 6

   حزمة البيانات المقترحة

   تحديد مواضع الشوائب المعروفة ونوعية الطريقة

   الطرق

   RP-HPLC وLC-MS مع المواد المرجعية للشوائب

   ما تقدمه Quickgene

   المواد المرجعية لشوائب سيماغلوتيد وتيرزيباتيد وريتاتروتيد

6. مناعية الشوائب الغائبة عن المرجع

   القسم 6

   حزمة البيانات المقترحة

   بيانات مناعية الشوائب

   الطرق

   اختبارات تنشيط الخلايا التائية في المختبر بشوائب عالية النقاوة

   ما تقدمه Quickgene

   تخليق شوائب عالية النقاوة حسب الطلب لاختبارات المناعية

7 أسئلة شائعة

• ما علاقة الإرشادات بـ Ph. Eur. 2034؟ تعتمد عتبات 0.1% / 0.5% / 1.0% من 2034، وتضيف متطلبات خاصة بالببتيدات تتعلق بالقمم المتزامنة الشطف والشوائب عالية الوزن الجزيئي والمقارنة بالمراجع البيولوجية.
• بماذا تختلف عن متطلبات FDA؟ تغطي إرشادات FDA لعام 2021 خمسة أدوية جنيسة فقط مرجعها من أصل DNA مأشوب، وتركّز على مقارنة كل شائبة مع حد 0.5% للشوائب الجديدة؛ أما إرشادات EMA فتشمل المواد الجديدة والجنيسة ومواد التجارب السريرية. للمقارنة بين المناطق الثلاث انظر صفحة المتطلبات التنظيمية.

المراجع